某年1月29日，某县吸毒卖淫女杨某（22岁）被人杀死在出租房内，现场勘査在浅蓝色塑料脸盆表面发现了多个血指纹，其中血量较大的血指纹已自然脱落。技术人员在现场首先测试了压敏胶粘取易脱落血指纹的可行性，将白色“迪丝飞丝”牌（德国产）即时贴压敏胶轻轻粘贴于血指纹上，压实后等待5min揭取下来，取得了较好的粘取效果(见图1)，成功固定和提取了残存的疑难血指纹。
图1枯取的现场血指印纹
本例血指纹处于较温暖干燥的环境中，血液属亲水疏油性粘稠状胶体溶液，随着血液中的水分快速挥发，体积发生了缩减，血指纹与载体表面上产生了水平剪切力，使其粘附力下降;塑料脸盆生产过程中表面有油性脱模剂或抛光剂，进一步降低了血指纹粘着力，因而现场血指纹容易出现“起皮”脱落现象。易脱落血指纹还常见于其它塑料表面,受到振动和风吹等外力极易脱落。涂液显现过程中特别是显现液中有双氧水时，血指纹受外力和双氧水分解产生气泡的共同作用，增大了被破坏的风险。
用指纹胶带或背胶纸等常见压敏胶均可粘取血指纹，随着压敏胶与血指纹接触时间延长粘着力逐渐增大，因而等待几分钟后揭取粘取效果更佳。粘贴即时贴后可用电吹风加热或恒温箱中50°C加热几分钟，提高压敏胶粘着力。对于粘取的潜在血指纹可用常规显现方法二次处理。
脱落的血指印易形成飞扬的干燥血粉末，其中的病毒等对人健康有潜在的风险，检测此类物证时注意采取必要的自我防护措施。
SYBRGreenI实时荧光PCR技术在人类DNA定量中的应用实时突光定量PCR技术（realtimequantitativePCR，RT-Q-PCR)是一种在PCR反应体系中加人荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法[1，2]。该技术不仅实现了对DNA模板的定量，而且具有灵敏度高、特异性和可靠性更强、能实现多重反应、自动化程度高、无污染性、具实时性和准确性等特点，目前已广泛应用于分子生物学研究和医学研究等领域。
在法庭科学领域，通过DNA荧光定量能够确定法医现场生物检材的DNA含量，从而大大提高现场生物检材DNA分型的成功率。目前只有ABI公司和Promega公司以TaqMan探针为基础建立了定量分析方法[34]，国内尚未见相关研究的报道。但Taq-Man[5-6]只能用于单次特异反应中，且价格也比较昂贵。本研究拟采用价格低廉的SYBRGreenI荧光染料所具有的非特异性，选择特异性高的基因组区段，检测常染色体上DNA量，以建立起一种高效且廉价的检测基因拷贝数的方法。
1材料与方法1.1实验材料
人生物检材样本来自广东省珠海市公安局DNA实验室2010年〜2011年日常受理的案件检材，包括现场血迹、衣物血渍、烟蒂、人体组织共28例;其他生物样品包括狗、牛、鱼、小鼠的血液，水稻，拟南芥叶片，大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的菌体。
1.2实验方法
1. 2.1样品及标准品的准备受理的案件中的现场
血迹、衣物血渍、烟蒂、人体组织、狗、牛、鱼、小鼠血渍采用chelex-100方法提取DNA;水稻，拟南芥叶片，大肠杆菌和枯草芽孢杆菌采用有机法提取DNA。
将人类标准DNAUOOng/^L)(美国AB公司QuantifilerHumanDNAStandard)稀释成以下5个梯度，浓度分别为：10rig/ML、lng/斗、0.lng/"L、
0. 01ng/pL、0.001ng/piL，标记为St.1-St.5。
1.2.2 荧光定量扩增扩增体系为25ML，含SYBRM?PremixExTaq™(TliRNaseHPlus,宝生物工程有限公司）12.5/xL,引物（Invitrogen公司合成)2yL，模板2ML(包含待测样品，标准品，阴性阳性对照），补水至25mL。引物信息见表1。
表1本研究所用的引物信息
基因 引物组 正向引物 反向引物 产物长度(bp)
Alu SGI TGAAACCCCGTCTCTACTAAAAATA TAACTCTGTTTGGATGCTTCTGTGA 96
Alu SG2 TGAAACCCCGTCTCTACTAAAAATA CCATTCTCCTGCCTCAGCCTCCCGA 114
Alu SG3 GTCAGGAGATCGAGACCATCCC TCCTGCCTCAGCCTCCCAAG 124
RBI SG4 CCAGAAAATAAATCAGATGGTATGTAAC TGGTTTAGGAGGGTTGCTTC 78
ND1 SG5 TGACTATGTGCGTGAGTGCAT GAGACACTGTCATTCACAGATGA 81
ATP SG6 CACTGTAAAGCTAACTTAGCATTAAC TGATGAGGAATAGTGTAAGGAGTAT 141
TH01 SG7 AGGGTATCTGGGCTCTGG GGCTGAAAAGCTCCCGATTAT 170-190
应用EppendorfMastercyclereprealplex型定量PCR仪进行定量反应，扩增程序为94"Clmin后，941：15s,60"Clmin,共40个循环;然后进行熔解曲线分析。1.2.3数振收集和分析应用DatabaseTool进行数据收集，用reaalplex进行数据分析，生成标准曲线。通过标准曲线计算样本DNA浓度。
1.2.4 STR分型根据定量结果，Identifiler™体系扩增，ABl3130xl基因分析仪电泳分离分析，得到分型结果。
2结果
2.1 熔解曲线结果
对浓度分别为10ng、lng、0.lng、0.Olng、
0. OOlng的人类标准DNA各3组进行熔解曲线分析，通过Mastercyclereprealplex分析软件得出引物组SG6的熔解曲线为单一峰，平均熔解温度在85.4XX见图1)。
2.2引物SG6扩增原始图谱及Ct值（见图2，表2)。
图1引物SG6溶解曲线
图2引物SG6扩增原始图谱
表2引物SG6扩增模板浓度总量分别为10ng，lng，0.lng,0.01ng,0.00lng的Ct值
Amount[ng] Ct值
10 14.14
10 14.13
10 14.25
1 17.33
1 17.37
1 17.18
0.1 20.68
0.1 20.63
0.1 20.63
1.00E-02 23.98
1.00E-02 24.35
1.00E-02 23.87
1.00E-03 27.31
1.00E-03 26.99
1.00E-03 27.08
2.3标准曲线结果
通过Mastercyclereprealplex分析软件得出引物SG6的斜率是一3.229，扩增效率为1.04，标准曲
线相关系数R2为0.999(见图3)。
图3引物SG6扩增效率、斜率及相关系数（R2)
2.4定量结果
上述常规案件DNA定量结果见表3,其中Y1〜Y8为现场血迹、Y9〜Y16为衣物血渍、Y17〜Y24为烟蒂、Y25〜Y28为人体组织，各检材均用chelex-100方法提取DNA，模板DNA都取2(xL，在相同体系相